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轉(zhuǎn)運(yùn)體在藥物研發(fā)中的應(yīng)用

—熱點(diǎn)問題—

第一題    25%是怎么計(jì)算的?

答：具體詳見國(guó)家藥監(jiān)局藥品審評(píng)中心頒布的【藥物相互作用研究技術(shù)指導(dǎo)原則】

膽汁清除率=膽汁排泄速度/血漿藥物濃度

                =膽汁流量*膽汁藥物濃度/血漿藥物濃度

第二題    ABC囊泡試驗(yàn)AMP組底物攝入比ATP組高？

答：出現(xiàn)這種情況需要考慮以下幾種可能因素：

1、評(píng)估在研藥物是否高滲透性藥物；

2、藥物與囊泡的孵育時(shí)間可能過短，需優(yōu)化藥物與囊泡的孵育時(shí)間；

3、由于底物與囊泡反應(yīng)終止后底物有可能從囊泡腔內(nèi)流回緩沖液，囊泡懸液轉(zhuǎn)移到過濾裝置必須迅速，并且必須遵循一致的時(shí)間軸。

第三題    針對(duì)口服多肽（分子量1 K左右)需要考察轉(zhuǎn)運(yùn)體的作用嗎？

答：國(guó)家藥監(jiān)局藥品審評(píng)中心頒布的【藥物相互作用研究技術(shù)指導(dǎo)原則】對(duì)口服多肽是否需要考察轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的藥物相互作用沒有明確要求，建議可進(jìn)行探索性的研究。

第四題    在運(yùn)用SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞的時(shí)候，最高濃度藥物的攝取率比次高濃度藥物的攝取率突然增加幾十倍，是什么原因？

答：

1、各組間攝取率的比較是基于細(xì)胞總蛋白或細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行攝取率的歸一化，因此必須保證每組總蛋白量的測(cè)定準(zhǔn)確，建議每組裂解完細(xì)胞后鏡下觀察所有細(xì)胞是否裂解充分；

2、高濃度藥物是否存在對(duì)細(xì)胞的毒性作用，造成大量細(xì)胞死亡。

3、藥物與SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞孵育時(shí)間需要進(jìn)行優(yōu)化，建議檢測(cè)不同孵育時(shí)間底物吸收情況繪制時(shí)間依賴曲線，以確定線性吸收的時(shí)間范圍。

第五題    SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞在藥物作用前去掉培養(yǎng)液后，是否需要用反應(yīng)緩沖液預(yù)孵育幾分鐘？

答：建議用不含底物的反應(yīng)緩沖液37℃預(yù)孵育5分鐘。

第六題    SLC轉(zhuǎn)運(yùn)體細(xì)胞藥物作用終止后，用乙腈、甲醇等有機(jī)溶劑或反復(fù)凍融方法都可以裂解細(xì)胞嗎？

答：高濃度（如80%乙腈）有機(jī)溶劑和反復(fù)凍融方法都可導(dǎo)致細(xì)胞破裂，釋放出細(xì)胞內(nèi)蛋白和攝入的底物，但有機(jī)溶劑是否影響后續(xù)底物的檢測(cè)，需要根據(jù)不同檢測(cè)方法的要求有不同的考量。

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