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胰腺病毒的凍干工藝研究

隨著基因治療研究的逐漸深入，作為其基礎(chǔ)的病毒載體研究也有了突飛猛進(jìn)的發(fā)展。采用病毒載體的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)治療人類疾病也從實(shí)驗室研究逐步進(jìn)入到臨床試驗階段。腺病毒因其對人致病性小且不誘導(dǎo)癌變，宿主細(xì)胞廣，繁殖度高，裝載容量大，越來越多的應(yīng)用于病毒載體的研究。但是腺病毒制品對溫度較為敏感，給運(yùn)輸、保存帶來較大困難，這在很大程度上限制了其在臨床上的應(yīng)用。

冷凍干燥技術(shù)廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、疫苗等，采用此技術(shù)可較好地保持產(chǎn)品原有的理化性質(zhì)和生物活性，且有效成分損失極少，產(chǎn)品因含水量低而易于長期保存。近年來，國外陸續(xù)出現(xiàn)將冷凍干燥技術(shù)應(yīng)用到病毒疫苗及腺病毒制劑研究中的報道。目前腺病毒的保存條件為 PBS緩沖液于 -20 ℃以下保存，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在這種條件下的腺病毒在25 ℃保存8 h及4 ℃保存24 h活性均下降10倍左右。研究胰腺病毒的凍干技術(shù)，有利于更好地方便臨床應(yīng)用。

1、材料與方法

1.1 實(shí)驗材料

1.2 蔗糖（分析純）；甘露醇注射液（藥用輔料）；明膠（BR，上海明膠廠）；L- 半胱氨酸（原料藥）；人血白蛋白。

1.3 實(shí)驗儀器

FD-503冷凍干燥機(jī)。

1.4 實(shí)驗方法

采用冷凍干燥方法，先將制品在 -40 ℃條件下預(yù)凍至 -35 ℃，真空度為10Pa以下，每2 h溫度上升5℃，至28℃左右保持3 h。凍干保護(hù)劑組分為 ：4% 明膠、5% 甘露醇、20%人血白蛋白及3%蔗糖。

3 結(jié)論

凍干過程一般包括預(yù)凍、升華干燥（第一階段干燥）、解吸干燥（第二階段干燥）。在研究腺病毒的凍干時，預(yù)凍十分重要，在預(yù)凍階段，降溫速度越快越好，這主要還是由凍干機(jī)的降溫性能決定的，而在此階段中，要掌握適宜的預(yù)凍時間，以確保抽真空之前所有的產(chǎn)品均已凍實(shí)，這樣就不致因抽真空而噴瓶，并且能減少“粗結(jié)晶”的出現(xiàn)，最終利于水分的控制。而在升華干燥階段，最關(guān)鍵的是要考慮在適宜的時間內(nèi)使制品干燥成型，那就必須獲得最適宜的熱量以確保腺病毒制品的升華，這與真空度密切相關(guān)。真空度 <10 Pa，并在升華干燥階段將制品溫度維持在 5 ℃為最好。在解吸干燥階段，主要是去除產(chǎn)品的結(jié)合水分，應(yīng)盡量將產(chǎn)品溫度迅速上升到設(shè)定的最高溫度，溫度過低，不能控制水分，溫度過高，對于腺病毒來說，又有失活的可能，在此階段將制品溫度維持在 28 ℃左右是最佳的。

• 實(shí)驗室真空冷凍干燥機(jī)

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