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支原體簡介
     支原體(Mycoplasma)，是大小介于細(xì)菌和病毒之間的一類無細(xì)胞壁的原核細(xì)胞微生物，他們是已知最小的自我復(fù)制的原核生物。支原體細(xì)胞能夠透過一般濾膜（0.22μm），且形態(tài)存在差異，呈高度多形性，有球形、桿狀、絲狀、分枝狀等多種。不能被革蘭氏染色，但可在瓊脂固體平板上形成“菌落"且可被甲基藍(lán)染色。

     支原體以寄生和共生方式存活，部分可能導(dǎo)致動(dòng)物、植物宿主的病變。對(duì)人致病的支原體主要有肺炎支原體、溶脲脲原體、人型支原體、生殖器支原體等。支原體是細(xì)胞污染物中比較常見的一種，細(xì)胞受支原體污染程度較輕時(shí)，不會(huì)表現(xiàn)出明顯的癥狀，但一旦這種潛伏的污染爆發(fā)時(shí)，細(xì)胞會(huì)大量脫落，細(xì)胞培養(yǎng)液會(huì)變渾濁。原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞都可能遭受支原體污染，根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)室的調(diào)查結(jié)果顯示，有15%-80%的細(xì)胞被支原體污染，傳代細(xì)胞的污染率高于原代細(xì)胞。
     盡管自然界中存在的支原體有120多種，但污染細(xì)胞的支原體主要有5種分別為：萊氏無膽甾原體、精氨suan支原體、口腔支原體、發(fā)酵支原體和豬鼻支原體，這5 種支原體占所有支原體污染的95%以上。支原體污染可能來自操作人員和細(xì)胞培養(yǎng)用原材料如血清和yi蛋白酶，也可能來自于本身已被污染的細(xì)胞系和毒種。細(xì)胞受支原體污染后，功能和活性都會(huì)受到影響，會(huì)帶來不可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和不安全的細(xì)胞制品。因此，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體檢測十分關(guān)鍵。

要求

    支原體檢測屬于監(jiān)管要求的一部分，其方法在全球范圍內(nèi)的一些藥典、法規(guī)和指導(dǎo)文件中均有說明。針對(duì)生物制藥產(chǎn)品檢測的檢測指導(dǎo)方針包括以下內(nèi)容：

•中國藥典2020版三部：3301 支原體檢查法
•歐洲藥典 2.6.7：Mycoplasmas
•美國藥典<63>：Mycoplasma Tests
•日本藥典18th版： Mycoplasma Testing for Cell Substrates used for
the Production of Biotechnological/Biological Products.

     必須證明用于生物制品生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)不含外源因子，包括支原體。支原體污染檢測必須在產(chǎn)品開發(fā)的各個(gè)階段進(jìn)行，包括原材料、細(xì)胞庫(MCB+WCB+EOPC)、病毒種子庫、未加工的收獲液材料和最終產(chǎn)品。

檢測方法

qPCR法是通過特異性的引物和熒光探針結(jié)合支原體靶基因，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增釋放熒光基團(tuán)并放大熒光信號(hào)的方式檢測待測樣本中是否含有支原體污染。 被污染的樣本將出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線。 PCR反應(yīng)時(shí)間通常需要1-2小時(shí)。
Mycoplasma
Detection
培養(yǎng)法
指示細(xì)胞法
qPCR法
    培養(yǎng)法是通過將待檢測樣本直接接種到適用于支原體生長的瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并通過顯微鏡檢查支原體菌落來檢測樣品中是否存在支原體污染。培養(yǎng)法檢測時(shí)間通常為28天。
    指示細(xì)胞法是使用Vero或NIH3T3細(xì)胞孵育支原體一周后，使用DNA結(jié)合熒光染料染色。在熒光顯微鏡下觀察待測樣本是否存在支原體污染。被污染的樣品指示細(xì)胞表面和周圍會(huì)出現(xiàn)明亮的熒光。

qPCR檢測試劑盒

Mycoplasma
qPCR Kit
        LPM MycProbe支原體Real-Time PCR試劑盒是基于LPM（Lux Preserve Matrix）高靈敏熒光探針法自主研發(fā)的創(chuàng)新產(chǎn)品，能夠?qū)Χ喾N支原體進(jìn)行快速、可靠檢測。 滿足《歐洲藥典》第2.6.7章的相關(guān)要
求，能夠高度特異性檢測肺炎支原體、口腔支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體等《歐洲藥典》和《日本藥典》規(guī)定的支原體亞型，檢測數(shù)據(jù)可靠，檢測靈敏度可達(dá)10 CFU/mL。

產(chǎn)品組成

特點(diǎn)

產(chǎn)品表現(xiàn)

康妍葆 MycProbe ?原體 Real-Time PCR 檢測試劑盒（100 Reactions）
產(chǎn)品?錄號(hào)： KYB-Q-001-C
產(chǎn)品描述：
MycProbe 支原體 Real-Time PCR 試劑盒是基于 LPM 高靈敏熒光探針法自主研發(fā)的創(chuàng)新產(chǎn)品，能夠?qū)Χ喾N支原體進(jìn)行快速、可靠檢測。經(jīng)驗(yàn)證滿足《歐洲藥典》第 2.6.7 章的相關(guān)要求，能夠高度特異性檢測肺炎支原體、口腔支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體等《歐洲藥典》和《日本藥典》規(guī)定的支原體亞型，檢測數(shù)據(jù)可靠，經(jīng)驗(yàn)證對(duì)常見細(xì)菌和真菌不產(chǎn)生交叉反應(yīng)，檢測靈敏度可達(dá) 10 CFU/mL。
產(chǎn)品組成：