N7-甲基鳥苷（N7-methylguanosine，m7G）是真核生物tRNA、rRNA和mRNA 5'cap中豐富的修飾之一。作為一種重要的表觀遺傳修飾，m7G RNA甲基化在基因表達(dá)、加工代謝、蛋白質(zhì)合成、轉(zhuǎn)錄穩(wěn)定等方面發(fā)揮著重要的作用，參與疾病發(fā)生發(fā)展等多種生命過程。

對(duì)于m7G RNA甲基化修飾的檢測(cè)，易基因采用基于抗體富集的m7G-MeRIP-seq，利用m7G特異性抗體富集發(fā)生m7G甲基化修飾的RNA片段（包括mRNA、lncRNA等rRNA去除所有RNA），結(jié)合高通量測(cè)序，對(duì)RNA上的m7G修飾進(jìn)行定位與定量，總RNA起始量可降低至10μg，僅需1μg總RNA。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：

?  起始量低：樣本起始量可降低至10-20μg，僅需1μg總RNA；

?  高通量測(cè)序：全轉(zhuǎn)錄組m7G位點(diǎn)高通量測(cè)序，可同時(shí)檢測(cè)mRNA和lncRNA；

?  樣本要求：可用于動(dòng)物、植物、細(xì)胞及組織的m7G檢測(cè)；

?  重復(fù)性高：m7G-MeRIP-seq的IP富集重復(fù)性高，降低抗體富集偏差；

?  應(yīng)用范圍廣：廣泛應(yīng)用于組織發(fā)育、干細(xì)胞自我更新和分化、熱休克或DNA損傷應(yīng)答、癌癥的發(fā)生與發(fā)展、藥物應(yīng)答等研究領(lǐng)域。

技術(shù)路線：

RNA樣品→文庫(kù)構(gòu)建→上機(jī)測(cè)序→數(shù)據(jù)分析

送樣要求：

典型案例

哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)錄組范圍mRNA內(nèi)m7G RNA甲基化圖譜

Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-methylguanosine Methylome in Mammalian Messenger RNA

背景

m7G RNA甲基化在真核mRNA中的存在和分布有待研究。

方法

本研究開發(fā)了基于抗體富集m7G RNA甲基化修飾測(cè)序方法：基于抗體富集的m7G-MeRIP-seq。

結(jié)果

本研究作者使用m7G-MeRIP-seq對(duì)RNA內(nèi)m7G甲基化進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組范圍的高通量測(cè)序分析，揭示了人和小鼠細(xì)胞內(nèi)m7G甲基化水平（mRNA分布、富集的共有motif等）。另外，作者將METTL1基因鑒定為在mRNA內(nèi)催化m7G修飾的一種甲基轉(zhuǎn)移酶，表明RNA內(nèi)m7G甲基化可影響mRNA翻譯。

Zhang LS, et al. Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-Methylguanosine Methylome in Mammalian mRNA. Mol Cell. 2019 Jun 20;74(6):1304-1316.e8.

圖：m7G-MeRIP-seq繪制的人和小鼠細(xì)胞系內(nèi)m7G位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄組范圍分布圖

參考文獻(xiàn)：

①    Zhang LS, et al. Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-Methylguanosine Methylome in Mammalian mRNA. Mol Cell. 2019 Jun 20;74(6):1304-1316.e8.