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柱色譜有分配色譜和吸附色譜兩種。分配色譜原理是溶質分子在兩種不同混溶的液相即固定相和流動相之間按照它們的相對溶解度進行分配。吸附色譜其原理是利用混合物中各組分在固定相上的吸附能力和流動相的解吸能力不同,讓混合物隨流動相流過固定相,發(fā)生了反復多次的吸附和解吸過程,從而使混合物分離成兩種或多種單一的純組分。柱層析中通常是吸附色譜。
在用柱色譜分離混合物時,將已溶解的樣品加入到已裝好的色譜柱頂端,吸附在固定相(吸附劑)上,然后用洗脫劑(流動相)進行淋洗,流動相帶著混合物的組分下移。樣品中各組分在吸附劑上的吸附能力不同,通常來說,極性大的吸附能力強,極性小的吸附能力相對弱一些。且各組分在洗脫劑中的溶解度也不一樣,而被解吸的能力也就不同。非極性組分由于在固定相中吸附能力弱,首先被解吸出來,被解吸出來的非極性組分隨著流動相向下移動與新的吸附劑接觸再次被固定相吸附。隨著洗脫劑向下流動,被吸附的非極性組分再次與新的洗脫劑接觸,并再次被解吸出來隨著流動相向下流動。而極性組分由于吸附能力強,因此不易被子解吸出來,隨著流動相移動的速度比非極性組分要慢得多(或根本不移動)。這樣經過反復的吸附和解吸后,各組分在色譜柱上形成了一段一段的層帶,若是有色物質,可以看到不同的色帶。隨著洗脫過程的進行從柱底端流出。每一色帶代表一個組分,分別收集不同的色帶,再將脫洗劑蒸發(fā),就可以得到單一的純物質。
柱層析實際上是在擴散和分離之間的權衡。太低的洗脫強度并不好,推薦用梯度洗脫。通常情況下收集的情況如下:10mg上樣量,1g硅膠,0.5ml收一餾分;1-2g上樣量,50g硅膠,20~50ml收一餾分。具體情況要看待分離的物質決定,附2文有一定參考價值。
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