熒光定量檢測(cè)的周期因檢測(cè)類型、樣本復(fù)雜度、儀器效率及實(shí)驗(yàn)流程等因素差異較大,短則幾十分鐘,長則數(shù)小時(shí)甚至更長。以下是常見場(chǎng)景的檢測(cè)周期分析:
一、按檢測(cè)場(chǎng)景分類
1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)
應(yīng)用場(chǎng)景:基因定量(如病毒載量、基因表達(dá)分析)、病原體檢測(cè)(如新冠病毒)等。
周期:
樣本制備:30分鐘~2小時(shí)(核酸提取、純化)。
上機(jī)檢測(cè):40分鐘~1.5小時(shí)(儀器運(yùn)行,完成40~50個(gè)循環(huán))。
總周期:通常2~4小時(shí)(含前處理),自動(dòng)化程度高的設(shè)備可縮短至1.5小時(shí)左右。
2.熒光免疫定量檢測(cè)
應(yīng)用場(chǎng)景:蛋白質(zhì)定量(如腫瘤標(biāo)志物、激素)、藥物濃度監(jiān)測(cè)等。
周期:
免疫反應(yīng):30分鐘~2小時(shí)(抗原-抗體孵育,取決于反應(yīng)溫度和試劑盒設(shè)計(jì))。
熒光檢測(cè):5~10分鐘(上機(jī)讀取熒光信號(hào))。
總周期:1~3小時(shí)(手工操作流程較長,全自動(dòng)設(shè)備可縮短至1小時(shí)內(nèi))。
3.細(xì)胞熒光定量分析(如流式細(xì)胞術(shù))
應(yīng)用場(chǎng)景:細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞表面標(biāo)志物定量、細(xì)胞周期分析等。
周期:
樣本染色:30分鐘~1小時(shí)(熒光標(biāo)記抗體孵育)。
上機(jī)檢測(cè):5~30分鐘(取決于細(xì)胞濃度和檢測(cè)參數(shù)數(shù)量)。
數(shù)據(jù)分析:10分鐘~1小時(shí)(復(fù)雜分析需更久)。
總周期:1~3小時(shí)。
4.小分子熒光定量(如熒光探針法)
應(yīng)用場(chǎng)景:環(huán)境污染物(如重金屬、農(nóng)藥殘留)、食品添加劑檢測(cè)等。
周期:
樣本前處理:1~4小時(shí)(萃取、純化等,視基質(zhì)復(fù)雜度而定)。
熒光檢測(cè):5~15分鐘(直接測(cè)量或反應(yīng)后測(cè)量)。
總周期:2~5小時(shí)(復(fù)雜樣本如土壤、血液需更長前處理時(shí)間)。
二、影響檢測(cè)周期的關(guān)鍵因素
樣本前處理復(fù)雜度
簡(jiǎn)單樣本(如血清、細(xì)胞裂解液):前處理時(shí)間短(30分鐘~1小時(shí))。
復(fù)雜樣本(如組織、糞便、環(huán)境樣本):需均質(zhì)化、去雜質(zhì)、濃縮等步驟,可能耗時(shí)2小時(shí)以上。
檢測(cè)儀器自動(dòng)化程度
全自動(dòng)設(shè)備:如集成樣本制備-檢測(cè)的熒光定量PCR儀,總周期可壓縮至1.5小時(shí)內(nèi)。
手動(dòng)/半自動(dòng)化設(shè)備:需人工操作加樣、孵育等步驟,周期延長至2~4小時(shí)。
熒光反應(yīng)動(dòng)力學(xué)
快速反應(yīng)體系(如實(shí)時(shí)PCR):檢測(cè)階段僅需數(shù)十分鐘。
慢反應(yīng)體系(如某些免疫熒光):需長時(shí)間孵育(如過夜),總周期可能超過12小時(shí)(但此類場(chǎng)景較少,多通過優(yōu)化試劑縮短時(shí)間)。
多指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)
單指標(biāo)檢測(cè):周期較短(如單重qPCR)。
多重檢測(cè)(如同時(shí)測(cè)10種病原體):儀器運(yùn)行時(shí)間增加,但前處理可同步進(jìn)行,總周期延長約20%~50%。
總結(jié)
熒光定量檢測(cè)的周期最短可控制在1小時(shí)內(nèi)(如簡(jiǎn)單樣本的快速免疫檢測(cè)),復(fù)雜場(chǎng)景則需數(shù)小時(shí)。實(shí)際周期需結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、樣本特性及設(shè)備性能綜合判斷,建議通過預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化流程或咨詢儀器廠商獲取針對(duì)性方案。
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