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熒光定量基因擴(kuò)增儀的操作流程也體現(xiàn)了其便捷性，科研人員只需將待測樣品與熒光標(biāo)記物混合后加入反應(yīng)體系，設(shè)置好反應(yīng)條件與參數(shù)，儀器便能自動完成PCR擴(kuò)增與熒光檢測的全過程。實驗結(jié)束后，計算機軟件會自動生成熒光信號隨反應(yīng)周期變化的圖表，并計算出目標(biāo)DNA的初始拷貝數(shù)或相對含量。這種自動化、智能化的操作方式，不僅大大提高了實驗效率，還降低了人為誤差，確保了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。
此外，熒光定量基因擴(kuò)增儀還具有廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域。在基礎(chǔ)研究領(lǐng)域，它被廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、基因突變篩查、遺傳連鎖分析等方面；在臨床診斷中，它則成為病原體檢測、腫瘤早期診斷及分型、遺傳病診斷等的重要工具。同時，在食品安全、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域，也發(fā)揮著越來越重要的作用。
熒光定量基因擴(kuò)增儀的檢定方法：
1.外觀及工作狀態(tài)檢查
-用目測法檢查儀器應(yīng)有下列標(biāo)志，儀器名稱、型號、制造廠名、出廠編號；儀器應(yīng)有制造計量器具許可證標(biāo)志(CMC)及編號，使用說明書、合格證、附件等技術(shù)文件齊全。
-檢查光電轉(zhuǎn)換器(如光電倍增管)應(yīng)無漏氣、漏油，響應(yīng)時間、靈敏度、穩(wěn)定性等性能指標(biāo)應(yīng)符合規(guī)定。
-檢查信號處理系統(tǒng)(如放大器、模數(shù)轉(zhuǎn)換器等)應(yīng)工作正常，各連接線接觸良好，無短路、斷路現(xiàn)象。
-檢查顯示系統(tǒng)(如顯示屏、顯示器等)應(yīng)清晰、準(zhǔn)確，無缺筆劃、亮點、暗點等缺陷，對比度、亮度調(diào)節(jié)功能正常。
-檢查溫控系統(tǒng)應(yīng)能準(zhǔn)確地達(dá)到并穩(wěn)定在設(shè)定的溫度值，溫度波動范圍應(yīng)在允許范圍內(nèi)。
-檢查機械傳動系統(tǒng)(如移液臂、攪拌器等)應(yīng)運行平穩(wěn)、準(zhǔn)確，無卡頓、抖動現(xiàn)象，定位精度應(yīng)符合要求。
2.性能檢定
-熒光強度測量準(zhǔn)確性：使用標(biāo)準(zhǔn)熒光物質(zhì)配制一系列不同濃度的溶液，分別測量其熒光強度，繪制熒光強度與濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后將已知濃度的待測熒光物質(zhì)溶液放入儀器中測量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出測量值與實際值之間的相對誤差，一般要求相對誤差在一定范圍內(nèi)(如±5)。
-線性范圍：選擇一種熒光物質(zhì)，配制從低濃度到高濃度的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，測量各濃度下的熒光強度，繪制熒光強度-濃度曲線。觀察曲線的線性部分所對應(yīng)的濃度范圍，即線性范圍。一般要求線性范圍應(yīng)覆蓋儀器聲稱的線性區(qū)間，且線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)滿足一定要求(如r≥0.99)。
-重復(fù)性：對同一濃度的熒光物質(zhì)溶液進(jìn)行多次重復(fù)測量(一般不少于6次)，計算測量結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。重復(fù)性越好，說明儀器在相同條件下測量結(jié)果的一致性越高，一般要求RSD在一定范圍內(nèi)(如≤1)。
-穩(wěn)定性：在一定時間內(nèi)(如連續(xù)工作4小時或8小時)，每隔一段時間(如30分鐘或1小時)對同一熒光物質(zhì)溶液進(jìn)行測量，觀察熒光強度的變化情況。計算熒光強度的平均值和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，以評估儀器的穩(wěn)定性。一般要求熒光強度的變化在允許范圍內(nèi)(如±3)。
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