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暗場(chǎng)生物顯微鏡是一種利用斜射照明法，以反射光和衍射光來(lái)觀察標(biāo)本的光學(xué)顯微鏡，以下將從其原理、結(jié)構(gòu)、使用方法、應(yīng)用場(chǎng)景等維度展開(kāi)詳細(xì)介紹：
工作原理
阻擋直射光：通過(guò)在聚光鏡下方設(shè)置不透明的光闌或使用特殊設(shè)計(jì)的暗場(chǎng)聚光鏡，阻擋透過(guò)標(biāo)本細(xì)節(jié)的直射光，使光線從側(cè)面以?xún)A斜角度照射到標(biāo)本上。
光的散射與反射：當(dāng)傾斜光線照射到標(biāo)本上時(shí)，標(biāo)本中的微小顆?；蚪Y(jié)構(gòu)會(huì)使光線發(fā)生散射、反射和折射。這些散射光和反射光進(jìn)入物鏡，而其他未與標(biāo)本相互作用的直射光則無(wú)法進(jìn)入物鏡，從而在暗背景上形成明亮的物體影像。
關(guān)鍵部件
暗場(chǎng)聚光鏡：是暗場(chǎng)顯微鏡的核心部件，常見(jiàn)的類(lèi)型有拋物面聚光鏡、心形聚光鏡和同心球面聚光鏡。其作用是將光線以特定的角度會(huì)聚到標(biāo)本上，產(chǎn)生斜射照明效果，使標(biāo)本產(chǎn)生散射光和反射光。
物鏡：用于收集標(biāo)本散射和反射的光線，并將其放大成像。通常需要使用干燥系物鏡中鏡口率在0.85以下的物鏡，以避免除微粒子反射的光束以外的旁射光束進(jìn)入物鏡前透鏡，干擾暗視野成像效應(yīng)。
光源：由于暗場(chǎng)顯微鏡中光能損失較大，因此需要選擇光強(qiáng)較大的光源，如鹵素?zé)?、汞燈或LED燈等，以提供足夠的照明強(qiáng)度，使標(biāo)本能夠產(chǎn)生清晰的散射光圖像。
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