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抗體篩選“天選”模式,日篩抗體三千個

來源:蘇州珀羅汀生物技術有限公司   2025年03月21日 08:49  

抗體篩選是抗體藥物開發(fā)中的關鍵一環(huán)。目前代表性的抗體篩選技術包括雜交瘤技術、轉(zhuǎn)基因小鼠技術、噬菌體展示技術、核糖體展示技術、單B細胞篩選技術等。

利用合成抗體庫以及從人或動物中分離單個B細胞克隆的抗體發(fā)現(xiàn)流程,在生成了候選抗體庫之后,候選抗體的單獨表達和評估卻往往依賴于勞動密集型程序(例如基于質(zhì)粒的克隆、轉(zhuǎn)染、基于細胞的蛋白質(zhì)表達、蛋白質(zhì)純化)。篩選過程需要數(shù)周至數(shù)月的時間,嚴重制約抗體篩選的速度和通量。

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代表性抗體篩選技術


無細胞蛋白表達(CFPS)為候選抗體單獨表達提供了一種新方式。該技術是一種無細胞膜限制、高開放性、高可控性的體外蛋白質(zhì)生物合成技術。


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無細胞表達抗體示意圖



在抗體篩選方面,CFPS相比于細胞表達系統(tǒng)具有顯著優(yōu)勢:

①無需耗時的基因克隆、轉(zhuǎn)染、細胞培養(yǎng)流程,從線性DNA片段到候選抗體分子僅需數(shù)小時;

②可高通量、自動化合成抗體,可適配高通量移液工作站進行高通量、自動化抗體表達,更節(jié)省人力成本。

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基于細胞表達系統(tǒng)與基于CFPS的抗體篩選對比


近日,珀羅汀生物攜手玄刃科技成功建立高通量無細胞蛋白表達工作站,日篩抗體三千個,自動合成無人工!抗體篩選告別以周甚至月為周期,進入“天選”模式!

珀羅汀無細胞抗體篩選,允許以線性化DNA片段作為模板,數(shù)小時內(nèi)表達候選抗體,產(chǎn)物可直接進行ELISA實驗,無需純化。另外,珀羅汀生物無細胞技術允許二硫鍵生成,既可表達VHH、scFv抗體分子片段,也可表達Fab、全長抗體,無抗體種類限制。

案例:利用CFPS從單B細胞中快速篩選單克隆抗體


該研究通過單B細胞建立抗體庫,通過CFPS表達并評估m(xù)Abs,在2天內(nèi)完成了抗原特異性mAbs的篩選。該方案包括從免疫兔的外周血中收集B細胞、通過抗原包被的磁珠和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)染色選擇B細胞、基于單細胞的PCR、在CFPS中生產(chǎn)mAb以及CFPS產(chǎn)物直接進行ELISA實驗。


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單B細胞+CFPS抗體篩選方案


參考文獻:

[1] Lu RM, Hwang YC, Liu IJ, Lee CC, Tsai HZ, Li HJ, Wu HC. Development of therapeutic antibodies for the treatment of diseases. J Biomed Sci. 2020 Jan 2;27(1):1.

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