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熒光分光光度計是一種定性、定量分析的儀器。通過熒光光譜儀的檢測，可以獲得物質(zhì)的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率、熒光強(qiáng)度、熒光壽命、斯托克斯位移、熒光偏振與去偏振特性，以及熒光的淬滅方面的信息。
熒光分光光度計的操作步驟：
1.開機(jī)：接通電源，打開主機(jī)開關(guān)，點(diǎn)燃(打開)光源后,根據(jù)說明書要求啟動計算機(jī)。
2.檢測前準(zhǔn)備：參照儀器說明書,在20天內(nèi)至少進(jìn)行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn)，檢測前儀器應(yīng)預(yù)熱。
3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應(yīng)在20°C土5°C;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無磁場、電場干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強(qiáng)度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時間等)。
4.基本測定
(1)熒光激發(fā)光譜測定
設(shè)置儀器參數(shù)，掃描發(fā)射波長，找到maxhem，以此為發(fā)射波長，記錄發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)波長的函數(shù)，便得到激發(fā)光譜。
(2)英光發(fā)射光譜測定
設(shè)置儀器參數(shù)，掃描激發(fā)波長，找到maxhex以此為激發(fā)波長，記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。
(3)差譜測定
設(shè)置儀器參數(shù)，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來，在一定的工作方式下掃描樣品溶液的發(fā)射波長，得到當(dāng)時的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。
(4)峰面積積分
選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞?，對樣品溶液進(jìn)行積分操作，即得到峰面積積分。
(5)熒光強(qiáng)度
選擇合適的測量參數(shù)，設(shè)置入ex、hem，采用定點(diǎn)讀數(shù)或掃描方式，即可測得所選波長處的熒光強(qiáng)度。
(6)定量測定
配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定的測定條件下，設(shè)置入ex、入em，按照由稀至濃的次序，測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，繪制熒光強(qiáng)度一濃度的工作曲線，不改變儀器參數(shù)測定未知溶液的熒光強(qiáng)度由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。
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