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與典同行|2020中國藥典增補(bǔ)版應(yīng)對方案——氨基酸篇

來源:合肥森譜科學(xué)儀器有限公司   2024年06月12日 18:21  


2023年10月,國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了《中華人民共和國藥典》(2020年版)第一增補(bǔ)本,已于今年3月12日正式實(shí)施。其中收載新增品種47個(gè),通用技術(shù)要求、指導(dǎo)原則6個(gè);修訂或訂正品種646個(gè)、通用技術(shù)要求15個(gè),以期更快更好地滿足藥品生產(chǎn)檢驗(yàn)、監(jiān)督管理等工作的需要。

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截圖來源:國家藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站


為更好地幫助客戶根據(jù)藥典新增通則和指導(dǎo)原則,開展相關(guān)檢測方法擴(kuò)項(xiàng)和升級(jí),賽默飛針對藥典的新增內(nèi)容,特推出2020中國藥典增補(bǔ)版應(yīng)對方案專題。第一期我們聚焦增補(bǔ)本(四部)新增的“9120氨基酸分析指導(dǎo)原則”。


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氨基酸作為構(gòu)成人體所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì),通常紫外吸收較弱,直接使用紫外方法檢測干擾較大,靈敏度低。故藥典中將通過合適的衍生試劑經(jīng)衍生化增加生色團(tuán)后,再使用液相色譜結(jié)合紫外檢測等手段作為藥品中氨基酸測定的常用方法。目前氨基酸衍生化主要分為柱前和柱后衍生,柱前衍生又有離線和在線衍生。藥典中常用的衍生化試劑主要有異硫氰酸苯酯(PITC)、氨基甲酸酯(AQC)、鄰苯二甲醛(OPA)、芴甲(FMOC)和2,4-二硝基氟苯(DNFB)等,不同的衍生化試劑在反應(yīng)原理、效率及穩(wěn)定性等方面不盡相同。

最新公布的2020版中國藥典第一增補(bǔ)本(四部),新增的9120氨基酸分析指導(dǎo)原則,除了對分析方法進(jìn)行了一定優(yōu)化外,方法三——柱前OPA和FMOC衍生氨基酸測定法中提到了自動(dòng)化柱前衍生法。





自動(dòng)化在線衍生-紫外檢測法


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賽默飛Vanquish液相色譜的自動(dòng)進(jìn)樣器配合變色龍軟件(Chromeleon),可提供用戶自定義進(jìn)樣程序(User-Defined Program, UDP),從而替代人工,實(shí)現(xiàn)定制化、自動(dòng)化的在線氨基酸衍生操作,契合2020藥典增補(bǔ)9120氨基酸指導(dǎo)原則中“衍生化操作也可由具有自動(dòng)衍生功能的進(jìn)樣器完成”的需求。

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Vanquish 液相色譜和自動(dòng)進(jìn)樣器

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在線針內(nèi)衍生程序示例

(Position R:A2:硼酸鹽緩沖液;Position R:A3:OPA溶液;Position R:A4:FMOC溶液;Position R:A5:進(jìn)樣稀釋液)(點(diǎn)擊查看大圖)

方法結(jié)合OPA和FMOC衍生試劑,Acclaim 120 C18色譜柱(PN: 059148)和Vanquish自動(dòng)進(jìn)樣器在線針內(nèi)衍生功能,可以輕松實(shí)現(xiàn)氨基酸的在線自動(dòng)化衍生、分析。無需手動(dòng)衍生,節(jié)省了試劑消耗和人力成本,同時(shí)在線衍生程序編輯智能、簡便,大幅提升了氨基酸檢測效率。

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自動(dòng)在線衍生-紫外檢測法分析氨基酸

(點(diǎn)擊查看大圖)

另外,指導(dǎo)原則方法三中提到一級(jí)和二級(jí)氨基酸衍生物“經(jīng)反相高效液相色譜分離后需用紫外光檢測器在338nm和262nm波長處分別檢測”?;陔p波長檢測要求,客戶通常會(huì)選擇二極管陣列檢測器,或單通道紫外檢測器結(jié)合波長切換等方法,而賽默飛Vanquish Core 紫外檢測器標(biāo)配雙檢測通道特點(diǎn),無需波長切換即可實(shí)現(xiàn)兩個(gè)波長的同時(shí)檢測,結(jié)果優(yōu)于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)高效液相色譜方法的檢測靈敏度。





非衍生-電霧式檢測法


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賽默飛電霧式檢測器(Charged Aerosol Detector,CAD)作為通用型檢測領(lǐng)域的典型代表,憑借其在靈敏度、重現(xiàn)性以及響應(yīng)一致性等方面的顯著優(yōu)勢而備受用戶關(guān)注和青睞,成為國內(nèi)外各大藥企和科研院所在研發(fā)和質(zhì)量控制等應(yīng)用方面的一大利器。而基于大部分氨基酸紫外吸收較弱的特點(diǎn),CAD又為氨基酸檢測,開辟了一條衍生方法以外的檢測捷徑。

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Vanquish 電霧式檢測器(CAD)


CAD檢測器結(jié)合賽默飛Hypercarb多孔石墨化碳色譜柱(PN:35005-154630)在極性化合物分析方面的優(yōu)勢,可以實(shí)現(xiàn)無需衍生的氨基酸直接分析,大大簡化了前處理步驟,也很好的規(guī)避了指導(dǎo)原則中提及的關(guān)于“二級(jí)氨基酸衍生重復(fù)性較差,OPA-氨基酸衍生物不穩(wěn)定”等實(shí)際問題。兩種方法在重現(xiàn)性和靈敏度方面的表現(xiàn)基本相當(dāng)。

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非衍生-電霧式檢測法直接分析氨基酸

(點(diǎn)擊查看大圖)




總  結(jié)

賽默飛Vanquish液相色譜平臺(tái),所具備的多種類型的檢測器和靈活可定制的程序軟件,結(jié)合兼具合規(guī)和創(chuàng)新的分析色譜柱,既可以滿足自動(dòng)化在線氨基酸衍生分析要求,又能拓展無需衍生的CAD直接分析氨基酸方法。在滿足藥典第一增補(bǔ)本(四部)中的新增指導(dǎo)原則的同時(shí),為相關(guān)制藥及食品等行業(yè)客戶在氨基酸檢測方面提供了更多更新穎的檢測思路和分析手段。



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