層粘連蛋白胚胎干細胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件介紹

來源：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司 2024年03月04日 11:00

層粘連蛋白（Laminin）胚胎干細胞培養(yǎng)基是一種常用的培養(yǎng)基，用于促進和維持胚胎干細胞的生長和自我更新。以下是一般的操作流程：

準(zhǔn)備工作：

確保操作區(qū)域干凈整潔，并做好手部衛(wèi)生。

準(zhǔn)備好所需器材，包括培養(yǎng)皿、離心管、移液器等。

制備培養(yǎng)基：

根據(jù)實驗室制定的配方，將各種組分按比例混合制備完整的Laminin胚胎干細胞培養(yǎng)基。通常包括DMEM/F12或者Essential8介質(zhì)等。

細胞預(yù)處理：

從合適來源（如小鼠或人類）獲取所需的新鮮或冷凍保存的低通行證級別（P0-P4）ES細胞。

在含有FeederLayer或無FeederLayer條件下進行擴增。

若使用無FeederLayer條件，則需要預(yù)先在耐熱涂層料中涂覆Laminin以提供粘附支持。

細胞孵育：

小心地將已經(jīng)預(yù)處理過并懸浮在適當(dāng)培養(yǎng)基中的ES細胞種植在含有Laminin的預(yù)涂層皿中。

盡量避免過度密集，以保證單個細胞形成分離生長。

培養(yǎng)條件的維護：

在恒溫孵育箱中將培養(yǎng)皿放置在37°C和5%CO2/空氣混合氣體環(huán)境下進行培養(yǎng)。

定期更換培養(yǎng)基，以去除代謝產(chǎn)物并提供新的營養(yǎng)物質(zhì)。

細胞密度過高時，可進行適當(dāng)?shù)南♂屢员３旨毎L和功能。

細胞檢查和分析：

使用顯微鏡觀察細胞形態(tài)、增殖情況及表型變化。

可通過流式細胞術(shù)、實時定量PCR等方法對ES細胞進行表型和功能分析。

請注意，具體操作步驟可能會根據(jù)實驗室內(nèi)特定要求、來源及目標(biāo)應(yīng)用而有所不同。因此，請根據(jù)實際情況調(diào)整操作步驟，并參考相關(guān)文獻或咨詢專業(yè)人員以獲取最佳結(jié)果。

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