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elisa實驗過程中可能出現(xiàn)的問題及處理!（轉(zhuǎn)）
elisa實驗過程中可能出現(xiàn)的問題及處理!
一般來講，實驗失敗應(yīng)當(dāng)是技術(shù)錯誤，設(shè)備損壞或反應(yīng)物失效。當(dāng)一個實驗失敗，檢查每個反應(yīng)物的有效期并且確定所有的反應(yīng)物均是按產(chǎn)品標(biāo)示的說明來存放的。另外，查看注意事項部分內(nèi)容。當(dāng)進(jìn)行試驗時如果出現(xiàn)可疑的現(xiàn)象或發(fā)生問題，可以參照下表來分析問題。
| 可能問題 | 可能原因 | 采用措施 |
| 無顏色 | 漏加酶標(biāo)抗體 | 檢查操作流程，注意不要漏加 |
| 酶標(biāo)抗體污染了疊氮鈉 | 應(yīng)嚴(yán)格避免疊氮鈉的污染 | |
| 不同試劑盒組份混用 | 檢查試劑標(biāo)簽，確認(rèn)所有組份屬于試劑盒中 | |
| 顯色弱 | 產(chǎn)品已經(jīng)超過有效期 | 檢查產(chǎn)品有效期 |
| 加入的試劑的體積和時間有誤 | 確認(rèn)所使用的每一個試劑的體積正確和加入的時間是符合說明書要求的 | |
| 試劑、樣品用前未能平衡 | 試劑、樣品用前置室溫平衡30分鐘 | |
| 孵育時間不足 | 檢查孵育時間 | |
| 在溫度變化的環(huán)境內(nèi)孵育酶標(biāo)板 | 確定孵育的溫度，避免溫度變化 | |
| 儀器設(shè)定不正確，濾光片不匹配 | 儀器是否設(shè)定正確，濾光片的使用是否正確 | |
| 使用了被污染的試劑 | 檢查試劑是否被污染 | |
| 拍板不* | 經(jīng)拍板后板子要干 | |
| 整板黃 | 緩沖液污染 | 制備新鮮的緩沖液 |
| 吸頭重復(fù)使用 | 吸頭應(yīng)一次性使用 | |
| 器材被污染 | 應(yīng)使用無污染的器材 | |
| 底物液被污染 | 更換底物液 | |
| 高復(fù)孔比 | 洗板不* | 洗板部分一定要做得* |
| 出現(xiàn)干板，沒有使用密封袋，密封袋重復(fù)使用 | 酶標(biāo)板應(yīng)保持濕潤，使用密封袋孵育，注意每步更換新的密封袋 | |
| 拍干不充分 | 經(jīng)拍板后板子要干 | |
| 孔內(nèi)加液體積不均等 | 確定移液器已校正并且工作正常，吸頭不得重復(fù)使用 | |
| 緩沖液污染 | 制備新鮮的緩沖液 | |
| 高本底 | 緩沖液污染 | 制備新鮮的緩沖液 |
| 每孔加液體積不均等 | 確定移液器已校正并且工作正常 | |
| 洗板不* | 洗板部分一定要做得* | |
| 拍干不充分 | 經(jīng)拍板后板子要干 | |
| 試驗中孵育時間溫度和時間不適當(dāng) | 確認(rèn)每一實驗步驟的孵育溫度和時間是否適當(dāng) | |
| 酶標(biāo)抗體稀釋錯誤 | 確認(rèn)工作濃度酶標(biāo)抗體配置正確 | |
| 底物液受光照時間較長或污染 | 底物液應(yīng)在使用前打開，并避免強光照射 | |
| 吸頭重復(fù)使用 | 吸頭應(yīng)一次性使用 | |
| 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差 | 標(biāo)準(zhǔn)加樣錯誤 | 確定移液器已校正并且工作正常 |
| 酶標(biāo)抗體濃度過低 | 確認(rèn)工作濃度酶標(biāo)抗體配置正確 | |
| 酶標(biāo)板顯色孵育時間、溫度不足 | 按說明書要求操作 | |
| 操作不慎 | 回顧操作流程，嚴(yán)格按說明書要求操作 |
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