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反相色譜柱是迄今在液相色譜中應用的技術，主要是因為它適用于分析絕大多數(shù)的非性物質和多的可離子化的及離子化合物。做好反相色譜柱使用及維護工作，可可以延長色譜柱使用壽命。
1、在條件允許情況下，在使用前盡量對色譜柱按照說明書方法進行柱效測試。以確保色譜柱的正常。
2、硅膠基質色譜柱使用溫度應低于60℃。
3、樣品：盡量將樣品溶解在流動相或性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動相或性相近的溶劑中。樣品溶液不應含有任何顆粒物，盡量使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過濾。樣品溶液如果使用溶劑(例如，流動相為水，樣品溶劑為甲醇)，為達到較好峰形，需要降低進樣量
4、流動相：流動相，是含有緩沖鹽的流動相，盡量當日實驗當日配制；如果使用了前日配制的流動相，請確保流動相pH值沒有變化，并確保流動相沒有長菌。 流動相的pH值取決于您的應用和色譜柱填料類型。我們建議在的色譜柱盡量在pH2~8范圍內使用。請盡量避免在常規(guī)流動相中使用比例的水(>95%)作為流動相，可能會造成保留時間的不穩(wěn)定或者色譜柱鍵合相的損害。
5、色譜柱平衡：在進行分析之前，請使用至少20倍柱體積的流動相沖洗色譜柱，以使色譜柱達到平衡。
6、色譜柱保護：對于“臟”的樣品以及組分未知的樣品，請盡量使用在線濾器或保護柱，如果可能，使用SPE小柱對樣品進行前處理是較好的選擇。
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