病毒大規(guī)模培養(yǎng)神器

微載體 Cytodex

入門篇

近期疫情逐漸穩(wěn)定，希望新的一年大家心寬體「胖」。 因為微載體的貼壁培養(yǎng)工藝廣泛應(yīng)用在疫苗的大規(guī)模生產(chǎn)中，接下來，咱們就聊聊病毒大規(guī)模培養(yǎng)的神器-微載體。那么什么是微載體？不同類型微載體的特點？微載體如何操作？以及有哪些成功的應(yīng)用案例呢？

圖 1 Cytodex 微載體上的 Vero 細胞（染色）

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什么是 Cytodex 微載體？

Cytodex 微載體是專門為培養(yǎng)各種動物細胞的高產(chǎn)量而開發(fā)的，針對不同類型動物細胞，有 Cytodex 和 Cytopore 兩個系列（見圖 1），在這里詳細地給大家介紹下 Cytodex。

Cytodex 微載體（Cytodex 1&3）是基質(zhì)為葡聚糖的微球，細胞可貼附微球 2D 表面生長，1 g 的 Cytodex1 微載體提供 4400 cm 2 的表面積給細胞貼附。 Cytodex 1幾乎適合所有貼壁細胞。 Cytodex 3表面包被膠原，適合無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。除標準的 Cytodex 產(chǎn)品外， Cytodex 還有經(jīng)過 Gamma 射線滅菌的產(chǎn)品，無需繁瑣的水化滅菌，可以直接使用。

Cytodex 微載體的特點

①表面特征經(jīng)過優(yōu)化，適于細胞高效粘附和伸展；

②大小和密度經(jīng)過優(yōu)化，有利于均勻懸浮，適于寬范圍的細胞優(yōu)良生長和高產(chǎn)；

③基質(zhì)是生物惰性的，為攪拌培養(yǎng)提供了一個堅硬但是非剛性的底物；

④透明，貼附的細胞用簡單的顯微鏡就能觀察到。

⑤可放大性好。動物細胞懸浮培養(yǎng)已經(jīng)達到 15,000 L 規(guī)模，貼壁依賴型細胞的微載體培養(yǎng)已經(jīng)達到 6,000 L 規(guī)模。

表 1 微載體的詳細參數(shù)

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微載體有哪些應(yīng)用？

微載體的應(yīng)用領(lǐng)域非常廣泛，疫苗、單克隆抗體、天然和重組蛋白，還有前景廣闊的免疫細胞治療領(lǐng)域。

歐洲和世界范圍內(nèi)的許多國家的絕大多數(shù)減毒或滅活疫苗類型的人用和獸用疫苗都在使用微載體進行生產(chǎn)（見表 2）。基于微載體生產(chǎn)的疫苗包括脊髓灰質(zhì)炎、風(fēng)疹、狂犬病、流感、日本腦炎（乙型腦炎）、呼吸道合胞病毒（RSV）和口蹄疫（FMD）疫苗等。與其他細胞培養(yǎng)工藝相比，微載體培養(yǎng)工藝可以提高產(chǎn)量，降低成本，并減少污染。Sinskey 等人觀察，使用微載體培養(yǎng)工藝，新德畢斯病毒（Sindbis virus）的單位體積產(chǎn)量可以達到滾瓶培養(yǎng)的 50 多倍。

表 2 微載體在疫苗工業(yè)中的應(yīng)用狀況

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Cytodex 微載體

可以培養(yǎng)哪些細胞？

實際上，所有培養(yǎng)的動物細胞類別都可培養(yǎng)。Cytodex1 微載體是一般應(yīng)用的細胞培養(yǎng)表面，凡是能在體外貼壁的細胞將都能夠粘附到 Cytodex1 微載體上。Cytodex3 也為許多在玻璃或者塑料表面粘附或者功能較弱的細胞 類型提供了一個改良的培養(yǎng)表面。

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表 3 按組織分類的在 Cytodex 微載體上培養(yǎng)的細胞類型列表

哺乳動物、禽類、魚和昆蟲細胞已經(jīng)在 Cytodex 微載體上培養(yǎng), 它們具有廣泛的組織來源，包括 原代細胞， 二倍體細胞株和 傳代/轉(zhuǎn)化的細胞系。雜交細胞系和腫瘤來源的細胞系也可以，根據(jù)相關(guān)統(tǒng)計大約有 150 多種細胞可以在 Cytodex 微載體上培養(yǎng)。

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可以在微載體上培養(yǎng)嗎？