Perrin于1926年首先描述了熒光偏振理論，他觀察到溶液中的熒光分子在受到偏振光激發(fā)時(shí)，如果在激發(fā)時(shí)分子保持靜止，該分子將發(fā)出固定偏振平面的發(fā)射光（發(fā)射光仍保持偏振性）。然而，如果分子旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)那么發(fā)射光的偏振平面將不同于初始激發(fā)光的偏振平面。

分子的偏振性與分子旋轉(zhuǎn)馳豫時(shí)間成比例，分子旋轉(zhuǎn)馳豫時(shí)間是分子轉(zhuǎn)過(guò) 68.5度角時(shí)所用的時(shí)間。 分子旋轉(zhuǎn)馳豫時(shí)間與粘度、溫度、分子體積和氣體常數(shù)有關(guān)。

原理 ： 當(dāng)熒光分子受平面偏振光激發(fā)時(shí)，如果分子在受激發(fā)時(shí)期（對(duì)于熒光素約持續(xù) 4納秒）保持靜止，發(fā)射光將位于同樣的偏振平面。如果在受激發(fā)時(shí)期，分子旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)偏離這一平面，發(fā)射光將位于與激發(fā)光不同的偏振面。 如果用垂直的偏振光激發(fā)熒光素，可以在垂直的和水平的偏振平面檢測(cè)發(fā)射光光強(qiáng)（發(fā)射光從垂直平面偏向水平平面的程度與熒光素標(biāo)記的分子的遷移率有關(guān)）。如果分子很大，激發(fā)時(shí)發(fā)生的運(yùn)動(dòng)極小，發(fā)射光偏振程度較高。如果分子小， 分子旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)速度快，發(fā)射光相對(duì)于激發(fā)光平面將去偏振化。 熒光顯微鏡 

熒光偏振的定義：

熒光偏振的應(yīng)用  http://www.leikon.cn

熒光偏振是特別用于研究分子間相互作用的技術(shù)。這種方法直接及時(shí)的檢測(cè)示蹤分子的結(jié)合 /自由率。熒光偏振實(shí)驗(yàn)在沒(méi)有固相支持的溶液中進(jìn)行，允許在低至皮摩爾級(jí)的范圍內(nèi)分析真實(shí)的平衡。熒光偏振檢測(cè)并不摻雜樣品，因此樣品可以被再次處理并被重新分析用于評(píng)價(jià) pH、溫度和鹽濃度改變對(duì)結(jié)合的影響。此外，熒光偏振實(shí)驗(yàn)是實(shí)時(shí)進(jìn)行的，并不局限于平衡結(jié)合的研究。

應(yīng)用領(lǐng)域概述  http://www.shkon.com

•  受體 /配體研究（如激素/受體檢測(cè)）

•  蛋白質(zhì) /多肽相互作用

•  DNA/蛋白質(zhì)相互作用

•  酪氨酸激酶檢測(cè)

•  競(jìng)爭(zhēng)性免疫檢測(cè)

熒光偏振技術(shù)的優(yōu)勢(shì)

熒光偏振技術(shù)比研究蛋白質(zhì)與核酸結(jié)合的傳統(tǒng)方法具有更多優(yōu)勢(shì)（特別是不生成有害的放射性廢物）并且檢測(cè)限更低，可達(dá)亞納摩爾級(jí)范圍。此外熒光偏振是真正均相的，允許實(shí)時(shí)檢測(cè)（動(dòng)力學(xué)檢測(cè)），對(duì)于濃度變化不敏感，是均相檢測(cè)形式（中間不含洗滌步驟）的*解決方案。

熒光偏振  http://www.shkon.com.cn

ACTA POLYMERICA SINICA No. 4 （ 1998 ）