一、保留值與分離度重現(xiàn)性不好原因分析

二、造成色譜峰（ 不對(duì)稱）拖尾的原因

1．色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷；

2．柱頭有污染；

3．樣品超載；

4．樣品溶劑不合適；

5．柱外效應(yīng)；

6．化學(xué)或二次保留（硅羥基）效應(yīng)；

7． 緩沖容量不足或不合適；

8． 重金屬污染。

三、如何解決峰形拖尾的問題

A. 與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題

1．流動(dòng)相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；

2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；

3.降低進(jìn)樣量至<1μg。

B. 與色譜柱有關(guān)的拖尾問題

1.如柱頭處有強(qiáng)保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；

2.使用保護(hù)柱。

C. 與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬

1.進(jìn)樣體積過大，（通?！?/SPAN>25μL）；

2.進(jìn)樣閥與色譜柱及檢測(cè)器之間的管路體積過大（*連接管應(yīng)<20cm，內(nèi)徑為0.007"）；

3.檢測(cè)器流通池的體積過大。

四、如何貯存色譜柱

1.防止緩沖溶液和水溶液流動(dòng)相產(chǎn)生微生物,做到流動(dòng)相用多少配多少, 或在水流動(dòng)相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)（一定當(dāng)心其毒性和潛在的爆炸性）；或在流動(dòng)相中加20%的有機(jī)改性劑，也可抑制微生物生長(zhǎng)， 有機(jī)改性劑還有助于流動(dòng)相脫氣。

2.盡可能將色譜柱貯存于100%有機(jī)溶劑（乙晴）中，避免在緩沖溶液中保存。

3.使用緩沖溶液后的色譜柱，應(yīng)用15～20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水-有機(jī)溶劑流動(dòng)相沖洗色譜柱，后換成100%有機(jī)溶劑貯存。

4.避免用純水沖洗鍵合致密的C18柱。

5.將色譜柱的兩端用堵頭擰好，以免柱床填料干裂。