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細(xì)胞凍存和復(fù)蘇常見(jiàn)問(wèn)題！

時(shí)間：2023/12/5閱讀：1075
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凍存細(xì)胞一般常用胎牛血清（FBS)和二甲基亞砜（DMSO）。血清是維持細(xì)胞生存環(huán)境；DMSO是冷凍保護(hù)劑，使細(xì)胞免受低溫冰晶形成、及滲透壓改變而導(dǎo)致的物理?yè)p傷；

細(xì)胞培養(yǎng)理論上基本建議的是兩種：70%培養(yǎng)基 + 10%DMSO+ 20%胎牛血清或者10%DMSO+ 90%胎牛血清 。

但經(jīng)過(guò)有些實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)："10%的DMSO，90%的血清"復(fù)蘇效果相對(duì)比"70%培養(yǎng)基 + 10%DMSO+ 20%血清"好。

 

 

DMSO產(chǎn)品咱就不多說(shuō)了，什么品牌都有，只要是選擇細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別的，效果應(yīng)該差不多。不過(guò)我用的是MP Biomedicals二甲基亞砜（DMSO），效果還可以。

對(duì)于胎牛血清的選擇就要相對(duì)謹(jǐn)慎了，市面上胎牛血清品牌可以說(shuō)是魚(yú)龍混雜，剛看過(guò)新聞的客戶(hù)就會(huì)知道，高仿產(chǎn)品橫行。慎重起見(jiàn)，給大家推薦CellMax品牌胎牛血清，目前有澳洲血清（庫(kù)存緊張）和中國(guó)血源胎牛血清可供大家試用，購(gòu)買(mǎi)。

 

 

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇需要注意哪些呢？

 

 

1、細(xì)胞本身的狀態(tài)

一般情況下細(xì)胞的復(fù)蘇還與原代細(xì)胞的活性有關(guān)，如果要凍存的細(xì)胞懸液本身活性不高的話，后面復(fù)蘇的存活率也不高。

 

2、凍存細(xì)胞數(shù)量要足夠

無(wú)論你再怎么小心，細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇的時(shí)候都是最脆弱的，總會(huì)死掉一批。所以，一開(kāi)始就要保證凍存細(xì)胞的數(shù)量足夠。

 

3、慢凍快融

一般情況下，細(xì)胞凍存時(shí)要遵循“慢凍快融"的原則。標(biāo)準(zhǔn)的降溫速度是1-2℃/min ，當(dāng)溫度到達(dá)-25℃，降溫速度可加快至5-10℃/min，到-80℃可直接入液氮。有些實(shí)驗(yàn)室是梯度凍存：4度，-20，-80，液氮，依次凍存。而復(fù)蘇速度越快越好。從液氮罐里取出來(lái)之后，迅速放在37°C水浴中，盡快融化

 

4、注意安全

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)里面最容易出事的部分。凡是和液氮接觸的操作，注意戴保護(hù)眼鏡和手套。注意：復(fù)蘇的時(shí)候，在水浴中搖搖動(dòng)的時(shí)候會(huì)有爆炸的可能性。另外， DMSO是有毒致癌的。接觸的時(shí)候一務(wù)必要帶好手套。

 

5、做好標(biāo)記

對(duì)于凍存細(xì)胞，一定要做好標(biāo)記。如：細(xì)胞名稱(chēng)、代數(shù)和凍存日期。特別是公共實(shí)驗(yàn)室，更要做好標(biāo)記，避免找不到自己的細(xì)胞。

 

6、DMSO是否去除

由于DMSO是一種有毒致癌物質(zhì)。那么，解凍之后，應(yīng)不應(yīng)該去除凍存液中的DMSO呢？答案是no。除了極少數(shù)特別注明的對(duì)DMSO敏感的細(xì)胞外，99%的細(xì)胞都不需要去除DMSO。后面細(xì)胞培養(yǎng)中頻繁換液會(huì)慢慢去除掉DMSO。

 

 

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