試劑盒應(yīng)用

本試劑盒適用于小鼠基因克隆，轉(zhuǎn)基因小鼠、基因敲除小鼠的快速PCR 鑒定。

結(jié)合Nu-Smart®平臺升級Mu-DNA 配方，5 分鐘內(nèi)裂解鼠尾、耳朵、腳趾。使用過程中無需大體積樣本、無需反復(fù)離心，從而獲得高質(zhì)量的DNA 模板。

試劑盒中2× EZ TaqMix(With Dye)，包含有聚合酶、dNTPs 和優(yōu)化的緩沖體系，PCR 過程中只需加入引物和模板DNA 進(jìn)行擴(kuò)增，減少開蓋/移液等操作，減少交叉污染。該體系中添加有電泳緩沖液和染料，PCR 結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，使用方便快捷。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

保存條件

-20oC 保存。

Mu-DNA 和2×EZ TaqMix(With Dye)，經(jīng)常使用可4℃保存，避免反復(fù)凍融。

需要準(zhǔn)備

金屬恒溫浴、離心機(jī)、PCR 儀

使用方法

1. 樣品處理

（1）用眼科剪剪取1-2mm 的鼠尾、耳朵、腳趾。

（2）加入20 μL Mu-DNA。

（3）充分混勻。

（4）置于55℃作用5 分鐘。

（5）10,000 轉(zhuǎn)離心60 秒取上清。上清即為DNA 模板。

2. 推薦如下反應(yīng)體系

3. 按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)

注意事項(xiàng)

一、試劑盒使用前注意事項(xiàng)

（1）所有試劑應(yīng)按照溫度儲存。請勿反復(fù)凍融。

（2）使用前后均需要對操作區(qū)進(jìn)行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無酶耗材。

（3）Mu-DNA 頻繁使用，可在4℃保存。長期不使用可放-20℃保存。

二、樣本注意事項(xiàng)

（1）不同組織使用不同的眼科剪進(jìn)行處理，防止交叉污染導(dǎo)致檢測結(jié)果偏差。

（2）組織剪取量不宜過大，1-2mm 最佳。

三、試劑盒使用過程中注意事項(xiàng)

（1）PCR 過程中推薦使用陰性對照和陽性對照。

（2）整個過程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中，減少環(huán)境污染。

（3）2×EZ TaqMix(With Dye)包含染料，可在PCR 反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。

四、試劑盒使用后注意事項(xiàng)

（1）Mu-DNA 處理后的DNA 模板可在-20℃保存至少1 個月。避免反復(fù)凍融，防止基因組斷裂。

（2）PCR 反應(yīng)完成后，嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開蓋。應(yīng)在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，防止氣溶膠污染。

（3）為防止試劑盒污染，請勿將不同批號試劑盒混用。

常見問題解析

問題可能原因推薦解決方案