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一、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

表格一：實(shí)驗(yàn)儀器

儀器	廠家	型號(hào)
細(xì)胞培養(yǎng)箱	Thermo Scientific	HERA cell CO2
酶標(biāo)儀	Thermo Scientific	Multiskan Spectrum

 

表格二：試劑

試劑	廠家
DMEM/F12 培養(yǎng)基	Gibco
MTT	Sigma
胰酶	索來寶
DMSO	Sigma

 

二、 實(shí)驗(yàn)步驟

收集生長狀態(tài)良好的神經(jīng)干細(xì)胞，消化并調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，分于 96 孔板，

每孔 100μL，5000 個(gè)細(xì)胞/孔。

細(xì)胞置于 37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜后，小心棄去培養(yǎng)基。

根據(jù)藥物在細(xì)胞溶液中的終濃度使用細(xì)胞培養(yǎng)液配制相應(yīng)的藥物儲(chǔ)備液，隨后加入至相應(yīng)培養(yǎng)液中形成不同濃度的工作液（藥物在工作液中的體積比為 5%）。每孔細(xì)胞分別加入 100μL 相應(yīng)的工作液，每種濃度均設(shè) 3 個(gè)復(fù)孔。同時(shí)設(shè)置正常培養(yǎng)孔（只加入*培養(yǎng)液培養(yǎng)的細(xì)胞）和空白孔（沒有細(xì)胞，只加入相同量的*培養(yǎng)液）。

37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 后小心吸去上清，加入 80μL 新鮮培養(yǎng)液

和 20μL MTT 溶液（5 mg/mL），并繼續(xù)培養(yǎng) 4h。

吸掉上清，每孔加入 150μL DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶標(biāo)儀 490 nm 處測(cè)量各孔的 OD 值。

計(jì)算細(xì)胞生長抑制率%

實(shí)驗(yàn)組OD值-空白組OD值

＝1- ´100% 對(duì)照組OD值-空白組OD值

 

三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

 

藥物濃度	1mM	2mM	3mM	4mM	5mM
OD 值	0.648678	0.651091	0.714305	0.777446	0.797002
	0.672702	0.712622	0.760024	0.783670	0.780728
	0.678589	0.733039	0.778568	0.806155	0.772555
	0.653876	0.699670	0.739670	0.778650	0.776490
	0.628845	0.687968	0.777404	0.758746	0.799384
均值	0.656538	0.696878	0.753994	0.780933	0.785232
細(xì)胞生長抑制率 % Mean±SD	23.87±1.99	18.76±3.06	11.51±2.72	8.10±1.70	7.55±1.22