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凍干人外周血細(xì)胞的方法、意義及應(yīng)用

閱讀:138      發(fā)布時(shí)間:2025-5-7
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 人外周血細(xì)胞常溫或者通常情況下保存周期短,需要超低溫設(shè)備,使用時(shí)不方便,為了提高其應(yīng)用價(jià)值開發(fā)了凍干型人外周血細(xì)胞凍干法。凍干型外周血細(xì)胞具有以下優(yōu)點(diǎn):

長期保存細(xì)胞:凍干技術(shù)可使外周血細(xì)胞處于休眠狀態(tài),長期保存細(xì)胞活性和功能,在需要時(shí)快速復(fù)蘇用于研究或治療,如保存免疫細(xì)胞用于后續(xù)免疫療法研究。

• 方便運(yùn)輸與共享:凍干后細(xì)胞便于運(yùn)輸,減少特殊設(shè)備需求和運(yùn)輸成本,利于不同實(shí)驗(yàn)室和醫(yī)療機(jī)構(gòu)間共享細(xì)胞資源,促進(jìn)科研合作和臨床應(yīng)用。

• 穩(wěn)定細(xì)胞特性:能有效保持細(xì)胞的生物學(xué)特性,包括細(xì)胞表面標(biāo)志物、細(xì)胞活性、細(xì)胞功能等,確保后續(xù)研究和應(yīng)用的準(zhǔn)確性。

• 應(yīng)急儲(chǔ)備:在自然災(zāi)害、戰(zhàn)爭等緊急情況下,作為細(xì)胞儲(chǔ)備,及時(shí)用于輸血、細(xì)胞治療等,保障醫(yī)療需求。

凍干型外周血細(xì)胞是采用真空冷凍干燥的方法進(jìn)行除水干燥的,干燥后的樣品外凍干粉餅,保存在棕色避光型西林瓶中,使用時(shí)可以加水或者復(fù)溶劑快速復(fù)溶。

凍干外周血細(xì)胞的流程

  1. 細(xì)胞準(zhǔn)備:收集外周血細(xì)胞,通過離心等方法去除雜質(zhì)和血漿成分,得到純度較高的細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞濃度至適宜范圍,如 1×10?-1×10? cells/mL。

  2. 添加保護(hù)劑:將凍干保護(hù)劑按一定比例加入細(xì)胞懸液中,輕輕混勻,使細(xì)胞充分與保護(hù)劑混合均勻。

  3. 預(yù)凍:將含有保護(hù)劑的細(xì)胞懸液放入低溫環(huán)境中預(yù)凍,如放入-80℃冰箱冷凍 2-4 小時(shí)或在液氮中快速冷凍,使細(xì)胞內(nèi)的水分凍結(jié),形成細(xì)小的冰晶,減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷。

  4. 升華干燥:將預(yù)凍后的細(xì)胞放入凍干設(shè)備中,開啟真空泵,降低壓力,使冰晶在低溫低壓下直接升華為水蒸氣并被移除,此過程需要嚴(yán)格控制溫度和壓力,防止細(xì)胞過熱或過度干燥。

  5. 后處理:升華干燥完成后,繼續(xù)在真空或充入惰性氣體的環(huán)境下進(jìn)行后處理,如進(jìn)一步降低溫度,使殘余的水分凍結(jié)并升華,確保細(xì)胞充分干燥,最后密封保存。

凍干評(píng)價(jià)方法

• 細(xì)胞存活率測(cè)定:通過臺(tái)盼藍(lán)拒染法、CCK-8 法等檢測(cè)凍干復(fù)蘇后細(xì)胞的存活率,評(píng)估細(xì)胞的活性。

 

• 細(xì)胞活性檢測(cè):采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力、細(xì)胞周期分布等指標(biāo),了解細(xì)胞的功能狀態(tài);還可通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)酶的活性等指標(biāo),評(píng)估細(xì)胞的代謝功能。

• 細(xì)胞功能評(píng)估:對(duì)于特定類型的免疫細(xì)胞,如 T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞等,可檢測(cè)其分泌細(xì)胞因子的能力、殺傷活性等,以評(píng)估細(xì)胞的功能完整性。

• 細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測(cè):利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面特定標(biāo)志物的表達(dá)情況,判斷細(xì)胞的類型和狀態(tài)是否發(fā)生改變。

未來應(yīng)用

• 個(gè)性化醫(yī)療:根據(jù)患者的個(gè)體差異,凍干保存患者自身的外周血細(xì)胞,用于未來的個(gè)性化治療,如 CAR-T 細(xì)胞療法等,提高治療效果和安全性。

• 細(xì)胞治療:為細(xì)胞治療提供更穩(wěn)定、可靠的細(xì)胞來源,如凍干的造血干細(xì)胞可用于治療血液系統(tǒng)疾病,凍干的免疫細(xì)胞可用于腫瘤的免疫治療等。

• 生物制藥:在生物制藥領(lǐng)域,凍干人外周血細(xì)胞可用于生產(chǎn)細(xì)胞來源的生物制品,如細(xì)胞因子、抗體等,提高生物制品的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

• 基礎(chǔ)研究:為研究人體免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等提供便利,科研人員可隨時(shí)獲取凍干的外周血細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),深入研究細(xì)胞的生理功能、病理機(jī)制等。

 


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