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除了臺盼藍染色法,以下這些方法也可以檢測細胞活性

時間:2025-5-13閱讀:181
除了臺盼藍染色法,以下這些方法也可以檢測細胞活性:


  • MTT 比色法

    • 原理:活細胞中的線粒體脫氫酶能將 MTT(四唑鹽)還原成不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜,并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。通過測定甲臜在特定波長下的吸光度,可反映細胞的活性和數(shù)量。

    • 操作:將細胞接種到 96 孔板中,培養(yǎng)一段時間后加入 MTT 溶液,繼續(xù)孵育。然后去除上清液,加入二甲基亞砜(DMSO)溶解甲臜,用酶標儀測定吸光度。

    • 應用:常用于細胞增殖、細胞毒性和藥物篩選等實驗。

  • CCK - 8 法

    • 原理:與 MTT 法類似,細胞內(nèi)的脫氫酶可以將 CCK - 8 試劑中的 WST - 8 還原成水溶性的橙黃色甲臜。活細胞數(shù)量與甲臜生成量成正比,通過檢測吸光度來衡量細胞活性。

    • 操作:將細胞接種于培養(yǎng)板,加入 CCK - 8 溶液,孵育后直接用酶標儀測定吸光度。

    • 應用:廣泛應用于細胞活性檢測、細胞增殖分析、藥物篩選等領(lǐng)域。該方法操作簡便,靈敏度高,且無需裂解細胞。

  • 熒光染色法

    • 原理:利用一些熒光染料對活細胞和死細胞進行特異性染色。例如,Calcein - AM 可被活細胞內(nèi)的酯酶水解,產(chǎn)生綠色熒光,而死細胞由于酯酶活性喪失,不能產(chǎn)生熒光;碘化丙啶(PI)只能進入死細胞,與 DNA 結(jié)合后發(fā)出紅色熒光。通過熒光顯微鏡或流式細胞儀可對細胞進行觀察和分析。

    • 操作:將細胞與熒光染料孵育,然后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。

    • 應用:可用于區(qū)分活細胞和死細胞,以及對細胞進行定量分析,常用于細胞凋亡、細胞周期等研究。

  • ATP 檢測法

    • 原理:ATP 是細胞內(nèi)的能量貨幣,活細胞中含有大量 ATP,而死細胞中的 ATP 會迅速降解。通過檢測細胞內(nèi) ATP 的含量,可反映細胞的活性。

    • 操作:使用熒光素 - 熒光素酶試劑盒,該試劑盒中的熒光素在熒光素酶和 ATP 的作用下會發(fā)出熒光,熒光強度與 ATP 含量成正比。將細胞裂解后加入試劑盒試劑,用熒光檢測儀測定熒光強度。

    • 應用:常用于細胞活性檢測、細胞增殖分析以及藥物對細胞代謝的影響等研究。



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