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               色譜分析中出現(xiàn)鬼峰怎么辦?

鬼峰產(chǎn)生的原因是多種多樣的，根據(jù)本人的經(jīng)驗(yàn)以及文獻(xiàn)報(bào)道，將原因歸納為以下幾個方面：1、流動相、樣品稀釋液、儀器或是容器中存在雜質(zhì)，當(dāng)梯度開始時(shí)由于有機(jī)相比例不高，洗脫能力不強(qiáng)，雜質(zhì)在色譜柱柱頭富集，隨著流動相比例變化，洗脫能力增強(qiáng)，富集的雜質(zhì)被洗脫，從而形成鬼峰。2、流動相脫氣不*。空氣在有機(jī)相和水中的溶解度不同，當(dāng)水和有機(jī)相混合時(shí)，氣泡就產(chǎn)生了3、操作問題情況梳理一1、試劑問題

a) 有機(jī)溶劑

甲醇制備工藝相對乙腈來說較為簡單，雜質(zhì)含量也較少。但是由于甲醇紫外吸收范圍比乙腈廣，所以當(dāng)使用紫外檢測器時(shí)，尤其是波長較低時(shí)，盡量使用乙腈作為有機(jī)相，用甲醇的話漂移太大。而用作梯度色譜的乙腈質(zhì)量要求較高，一般用進(jìn)口梯度色譜乙腈能夠很好的減少鬼峰的出現(xiàn)。

b) 水

很多單位用自制蒸餾水作為水相，但是結(jié)果并不是很好。原因就是一些低沸點(diǎn)的有機(jī)雜質(zhì)并不能夠通過蒸餾除掉。有條件的盡量用HPLC級的純水，沒有條件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水代替，但是如果色譜條件比較嚴(yán)格也是有可能出問題的。

c) 其它試劑

緩沖鹽、TFA、EDTA等試劑也會對流動相造成很大的影響，盡量用純度高的試劑配制流動相。

2、儀器問題

a) 液相的流動相管路被污染。

長時(shí)間的使用含水量較高的流動相(尤其是加入緩沖鹽的)，細(xì)菌就容易在管路中滋生，細(xì)菌的代謝產(chǎn)物或是細(xì)胞碎片能造成鬼峰。

b) 輸送泵故障，造成系統(tǒng)壓力不穩(wěn)，從而產(chǎn)生鬼峰。

c) 單向閥堵塞，造成系統(tǒng)壓力不穩(wěn)，從而產(chǎn)生鬼峰。早期島津的液相單向閥貌似不能用純乙腈作為流動相，現(xiàn)在應(yīng)該已經(jīng)得到改進(jìn)。

情況梳理二1、 在線脫氣機(jī)脫氣不*。

2、 兩種流動相的有機(jī)相比例相差太大。例如A為100%水，B為100%乙腈。在梯度條件允許的情況下盡量減少兩中流動相之間的差距，降低空氣在兩中流動相中溶解度的差異，從而減少氣泡的產(chǎn)生。

3、 流動相配置好后預(yù)先超聲脫氣。

情況梳理三

1、流動相配置過程中受到污染

a) 盛放流動相的容器或是量具受到污染。

這種污染可能來自于洗滌劑、鉻酸洗液或是其他實(shí)驗(yàn)人員用完后的殘留雜質(zhì)。流動相容器的清洗一般用干凈的水+有機(jī)溶劑涮洗就行，過多的清洗步驟反而可能造成二次污染。有時(shí)流動相容器的塑料蓋碎片都有可能是雜質(zhì)的來源。

b) pH計(jì)。

很多pH計(jì)以聚碳酸酯作為外殼，然而聚碳酸酯是可以溶于有機(jī)溶劑的，所以盡量使用玻璃pH計(jì)來測量流動相的pH。

c) 濾膜。

劣質(zhì)的或者型號錯誤的濾膜往往是鬼峰出現(xiàn)的原因。

d) 放置時(shí)間過長。

流動相在空氣中暴露時(shí)間過長，就可能吸收空氣中的有機(jī)雜質(zhì)，有時(shí)流動相中的添加劑，例如TFA，時(shí)間長了會氧化從而產(chǎn)生雜質(zhì)。

2、儀器樣品稀釋液與流動相極性或者pH相差太大。

這也是導(dǎo)致鬼峰的原因之一，這種問題很有可能導(dǎo)致樣品分為兩個不同的階段出峰，從而產(chǎn)生雙峰或者多峰。