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描述：

MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀 酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT 結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比，吸光度越大，表示細(xì)胞活性越強(qiáng)，說明藥物毒性越小。該方法已廣泛用于一些生物活性因子 的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。

組分：MTT（25mg）、MTT 溶劑（5ml）、Formazan 溶解液（55ml）

使用方法：

1、將細(xì)胞板放置于無菌操作臺中。 

2、在細(xì)胞板中每孔加入10%體積的 MTT溶溶劑。 

MTT溶液的配制：用5ml MTT溶劑溶解25mg MTT，配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20℃避光保存，也可以根據(jù)需要適當(dāng)分裝后-20℃避光保存。

3、將細(xì)胞板放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育3-4h。做對比試驗(yàn)時(shí)，孵育時(shí)間需一致。 

4、孵育后將細(xì)胞板從培養(yǎng)箱中拿出，按照下面的方法溶解產(chǎn)生MTT甲臜結(jié)晶物。 

1）如果是貼壁細(xì)胞，則棄去培養(yǎng)基。加入與初始體積等量的Formazan Solvent。每孔的溶解液體積可能不同，但為了方便比較，總體積須保持一致。 

2）如是非貼壁細(xì)胞或培養(yǎng)基的去除會造成MTT甲臜丟失，則直接在培養(yǎng)基中加入與初始體積等量的溶解 液。 

3）加入Formazan Solvent 后，須在1h內(nèi)完成讀數(shù)。 

5、在搖床中溫和地振蕩可增強(qiáng)溶解。某些情況下，尤其是細(xì)胞密度較高時(shí)，需要反復(fù)吹打使 MTT 甲臜結(jié)晶物溶解。 

6、分光光度計(jì)測定OD570和參考波長OD690。 

7、96 孔板可以在配備合適濾光片的酶標(biāo)儀上進(jìn)行檢測。 

8、其他類型的多孔板則需用合適大小的比色皿或讀板器進(jìn)行分光光度檢測。

注意事項(xiàng)：

1、由于使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。

2、若所用受試化合物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2~3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。 

3、Formazan的生成不僅與活細(xì)胞數(shù)成正比，也受作用時(shí)間的影響，因此樣品較多時(shí)測定的結(jié)果可能隨時(shí)間而變。 

4、本品含有致癌物質(zhì)，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

5、本產(chǎn)品只用于科研，不可應(yīng)用于臨床或診斷。

產(chǎn)品引用文獻(xiàn)：

SPI1 Mediates N-Myristoyltransferase 1 to Advance Gastric Cancer Progression via PI3K/AKT/mTOR Pathway

Ping Qiu, Xing Li, Min Gong, Ping Wen, Jianbo Wen, Linfang Xu, Guiliang Wang

Canadian Journal of Gastroenterology and Hepatology. 2023 Mar 17 .

影響因子： 2.605

Long noncoding RNA MEG3 suppresses cell proliferation, migration and invasion, induces apoptosis and paclitaxel-resistance via miR-4513/PBLD axis in breast cancer cells

Mingzhi Zhu,Fang Wang,Hailong Mi,Lin Li,Jing Wang,Mingli Han,Yuanting Gu

Cell Cycle. 2020 Oct 30 .

影響因子： 3.699