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梯度方法開發(fā)攻略之梯度條件的影響因素
閱讀：3038 發(fā)布時間：2019-10-10
今天，將為您帶來梯度方法開發(fā)攻略②：梯度條件的影響因素，共同探討在梯度條件下需要注意哪些因素。
1. 不同色譜柱的分離選擇性
2. 梯度斜率
3. 初始有機相比例
4. 梯度拐點設置
5. 流動相或柱溫優(yōu)化
不同色譜柱的分離選擇性
不同色譜柱的疏水性、表面極性存在差異，因此化合物的出峰時間也會受到影響，我們可以根據(jù)化合物的特性選擇合適的色譜柱。
梯度斜率
梯度斜率 N =Δ B% / tGra （% / min）
梯度斜率越大，洗脫速度越快，但分離度同時下降。
初始有機相比例
初始比例 Binitial %，通常對于早出峰的化合物保留分離影響大。
梯度拐點設置
合理設置梯度拐點，可以有效地縮短分析時間。
流動相或柱溫優(yōu)化
溫度從35℃升高到45℃，增強了化合物的分離度。
調(diào)整流動相比例，可以有效縮短分離時間。
通過更換色譜柱柱長、粒徑、流速、來獲得快速分析結果。
梯度分析中需要注意的幾個問題
1）梯度條件需要進行充分洗脫；
2）梯度進行完畢需要重新平衡回初始狀態(tài)，才能進行下一個梯度序列的分析；
3）梯度條件會造成基線漂移，需要進空白樣確定梯度基線變化；
4）注意觀察壓力變化情況；
5）當流動相中含有緩沖鹽時，在梯度有機相高點不得鹽析。