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在生物醫(yī)藥領(lǐng)域，多肽藥物因其高特異性和低毒副作用而展現(xiàn)出巨大的治療潛力。然而，多肽藥物的穩(wěn)定性和生物活性常常受到其聚集體形成的影響。多肽藥物中的聚集體既有共價結(jié)合聚集體，也有非共價結(jié)合聚集體，后者因?yàn)榉翘禺愋曰ハ嘧饔昧θ?，易受聚集體與尺寸排阻色譜柱間的相互作用力而發(fā)生狀態(tài)變化，為分析工作造成困難。

在此背景下，分析這兩種聚集體對多肽藥物穩(wěn)定性的研究顯得尤為重要。為此島津基于生物惰性液相開發(fā)了一種可以同時檢測多肽藥物中共價結(jié)合二聚體和非共價結(jié)合二聚體的方法，為相關(guān)研究工作者提供參考。

樣品準(zhǔn)備：共價結(jié)合二聚體、非共價結(jié)合二聚體、多肽藥物非破壞樣品和通過強(qiáng)制降解實(shí)驗(yàn)得到的多肽藥物破壞樣品，使用洗脫液適當(dāng)稀釋后制備成待測溶液。

分析條件：

儀器：島津生物惰性超高效液相色譜系統(tǒng)Nexera XS inert

色譜柱：SHIMSEN Ankylo SEC-120（300×7.8mm I.D.,3.0μm）

洗脫液：100mM硫酸銨水溶液（含20%乙腈+0.1%TFA）

檢測波長：220nm

其他條件略

n                      分離度評價

基于上述分析條件，將共價結(jié)合二聚體和非共價結(jié)合二聚體加入多肽藥物非破壞樣品中，以評價分離度。分析結(jié)果顯示，三個目標(biāo)峰的分離度大于1.5，說明分離度良好。

多肽藥物、共價結(jié)合二聚體和非共價結(jié)合二聚體色譜圖

分離度結(jié)果

n                      重復(fù)性考察

將分離度評價使用的樣品重復(fù)進(jìn)樣6次，以考察重復(fù)性。6次重復(fù)進(jìn)樣結(jié)果顯示，三個目標(biāo)峰保留時間和峰面積的RSD分別在0.024%~0.025%、0.048~0.130%，說明重復(fù)性良好。結(jié)果如下：

多肽藥物、共價結(jié)合二聚體和非共價結(jié)合二聚體重復(fù)進(jìn)樣色譜圖（n=6）

重復(fù)性結(jié)果（n=6）

n                      破壞樣品分析

將多肽藥物破壞樣品按照開頭分析條件進(jìn)樣分析，得到結(jié)果如下：其中在多肽藥物破壞樣品中，檢測到非共價結(jié)合二聚體（雜質(zhì)），峰面積百分比為6.934%，未檢測到共價結(jié)合二聚體。

多肽藥物破壞樣品色譜圖

破壞樣品分析結(jié)果

n                      總結(jié)

本研究使用島津生物惰性超高效液相色譜系統(tǒng)建立了一種用于檢測多肽藥物中的非共價結(jié)合二聚體及共價結(jié)合二聚體雜質(zhì)的新方法。

生物惰性超高效液相Nexera XS inert可耐受高鹽洗脫液，無金屬的設(shè)計避免了金屬敏感型物質(zhì)的吸附；SHIMSEN Ankylo SEC 120色譜柱及其洗脫液的配方，最大限度*地降低了聚集體雜質(zhì)與色譜柱之間的非特異性相互作用，從而實(shí)現(xiàn)良好的分離效果。該方法展現(xiàn)出良好的分離度和重復(fù)性，適合用于多肽藥物中共價結(jié)合二聚體和非共價結(jié)合二聚體雜質(zhì)的含量測定與評估。

ü                      更大限度降低因金屬吸附而造成的損失

ü                      輕松應(yīng)對高鹽濃度和極端pH流動相的挑戰(zhàn)

ü                      獲得卓越的靈敏度、重現(xiàn)性和分離度

*注：文中涉及最大等程度類描述，僅限于實(shí)驗(yàn)組別對比結(jié)果

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