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層析柱是凝膠層析技術中的主體，一般用玻璃管或有機玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同，從而分離的一種層析法。層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外， 直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關，但由于軟凝膠柱過高擠壓變形阻塞，一般不超過1米。分族分離時用短柱，一般凝膠柱長20-30厘米，柱高與直徑的比較5:1─10:1，凝膠床體積為樣品溶液體積的4-10倍。 分級分離時柱高與直徑之線為20:1─100:1，常用凝膠柱有50×25厘米，10×25厘米。層析柱濾板下的死體積應盡可能的小，如果支掌濾板下的死體積大，被分離組分之間重新混合的可能性就大，其結(jié)果是影響洗脫峰形，出現(xiàn)拖尾出象，降低分辯力。在分離時，死體積不能超過總床體積的1/1000。

簡述層析柱的安裝流程：

1、檢測層析柱的各個部件，確保干凈、完整，擰上下端堵頭，擰緊膨脹圈，然后將層析柱垂直 固定在鐵架臺上，將裝柱器安裝在層析柱上端。  

2、往層析柱中加入適量的20%乙醇，打開下端口，重力流，排除下篩網(wǎng)中滯留的氣泡，在液面 低至1-2cm高度時關閉層析柱下端出口。

3、用玻璃棒緊靠柱子內(nèi)壁引流，將搖勻的介質(zhì)加入到層析柱中，這可以減少氣泡的產(chǎn)生。迅速 用20%乙醇填滿柱子和裝柱器，裝上裝柱器蓋子，連接到?KTA上。

4、打開層析柱下端，開始以30cm/h流速裝柱，直至柱床界面平穩(wěn)，停止裝柱，打開裝柱器蓋子，用虹吸法去除界面上端的液體，去掉裝柱器，然后小心的用20%乙醇封滿 柱子剩余部分。

5、擰緊膨脹圈，繼續(xù)用裝柱流速壓柱，至少保持3個柱體積，以界面不變?yōu)橹鳎诮缑嫣幾錾嫌浱?，關閉泵，并關閉柱子下端出口，使層析柱上端和泵斷開（轉(zhuǎn)接器上接口是打開的），略擰松 膨脹圈，緩慢向下轉(zhuǎn)動調(diào)節(jié)桿，到記號處停止，然后再擰緊膨脹圈，關閉上接口。

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