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1     細(xì)胞分選方法概述

細(xì)胞學(xué)研究中一個很重要的課題就是細(xì)胞的分離純化，尤其是需要對某種特定的細(xì)胞進行功能研究，如對細(xì)胞培養(yǎng)上清液通過ELISA分析檢測細(xì)胞因子、細(xì)胞共培養(yǎng)檢測細(xì)胞功能等，都需要得到高純度的目的細(xì)胞。因此，高效地分離所需要的目的細(xì)胞是進行細(xì)胞功能研究的先決條件。

細(xì)胞分選（cell sorting）是指根據(jù)細(xì)胞所具有的特性把某種特定的細(xì)胞亞群從混合的細(xì)胞樣品中分離出來的一種技術(shù)，它是對某一特定細(xì)胞進行生化分析和功能分析的前提和基礎(chǔ)。常用的細(xì)胞分選方法主要有兩大類：一類是基于細(xì)胞物理性質(zhì)的密度梯度離心法（Density gradient centrifugation），另一類是基于免疫識別特性的方法，包括熒光激活細(xì)胞分選方法（Fluorescence-activated cell sorting，F(xiàn)ACS）和磁性激活細(xì)胞分選法（Magnetic-activated cell separation，MACS）。

密度梯度離心法是基于不同的細(xì)胞群之間存在沉降系數(shù)差異的原理建立起來的，在一定的離心力的作用下，不同種類的細(xì)胞會以各自不同的速度沉降，在密度梯度不同的區(qū)域上會形成區(qū)帶。這種方法簡單易行，但此種方法分離所得到的細(xì)胞純度較低，且細(xì)胞表面的標(biāo)志不明確，特異性較差，目前使用較少。

流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的一種利用流式細(xì)胞儀（Flow cytometer）進行快速定量分析細(xì)胞亞群的物理化學(xué)特性，根據(jù)這些物理化學(xué)特性精確分選細(xì)胞的新技術(shù)，F(xiàn)CM主要包括流式分析和流式分選兩部分。FACS最初于1972年提出，是指熒光驅(qū)動的細(xì)胞分選新技術(shù)，即利用分選型流式細(xì)胞儀分選標(biāo)記有熒光素偶聯(lián)抗體的細(xì)胞樣品，通過熒光系統(tǒng)區(qū)分目的細(xì)胞和非目的細(xì)胞。流式細(xì)胞儀通過接受激光照射后液流內(nèi)細(xì)胞的散射光信號和熒光信號反映細(xì)胞的物理化學(xué)特性，如細(xì)胞的大小、顆粒度以及抗原分子的表達情況等，目前已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究。流式細(xì)胞分選被認(rèn)為是細(xì)胞分選的“金標(biāo)準(zhǔn)”，它分選所得的細(xì)胞純度高、回收率高、且操作環(huán)境為全封閉型，不易被污染。但是，該方法所需設(shè)備比較昂貴，耗時，且需要高水平的技術(shù)支持以及專業(yè)的操作人員；且該方法在一段時間內(nèi)只能分選一個細(xì)胞樣品，若試驗需要從不同的樣品中分選目的細(xì)胞時這種方法不可行；同時，由于FACS對細(xì)胞刺激較大，因此對分選出的細(xì)胞活性有較大影響。

磁性細(xì)胞分選（MACS）是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的，是用結(jié)合有抗體的免疫磁珠與樣品細(xì)胞進行孵育，表達有相應(yīng)抗原的細(xì)胞就會特異性的結(jié)合在包被有抗體的免疫磁性微粒上，當(dāng)體系緩慢的經(jīng)過磁場時，帶有磁珠的細(xì)胞就會滯留在磁鐵上，而非目的細(xì)胞由于未結(jié)合磁珠仍存在與混合細(xì)胞懸液中，從而達到分離純化細(xì)胞的目的。MACS法是一種相對高效簡便的細(xì)胞分選方法，所需設(shè)備簡單，只需一塊專用磁鐵即可進行分選，操作較為簡單，對操作人員的技術(shù)要求也不高，一般實驗室都可進行磁性分選。磁性分選只是讓細(xì)胞處于一個低磁場中，基本可以忽略對細(xì)胞的影響，分離得到的細(xì)胞具有較高的復(fù)蘇率及細(xì)胞活性，對于下游應(yīng)用影響較小，在保持細(xì)胞活性方面優(yōu)于流式分選。磁性分選因其高靈敏度、高純度、易操作、對目的細(xì)胞刺激較小等特性成為了細(xì)胞分選的方法，具有潛在的應(yīng)用前景。

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