蛋白質(zhì)測(cè)序樣品制備檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在dànbáizhì組學(xué)中，質(zhì)譜（MS）是核心分析技術(shù)，而其分析結(jié)果高度依賴于樣品的質(zhì)量。無論是全蛋白組分析、修飾組學(xué)、還是靶向蛋白定量，都必須以高質(zhì)量的樣品制備為前提。本文將系統(tǒng)解析dànbáizhì測(cè)序的樣品制備流程，涵蓋不同樣本類型的預(yù)處理策略、蛋白提取、酶解、純化與質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，并介紹百泰派克生物科技在這一環(huán)節(jié)的解決方案。

一、dànbáizhì測(cè)序前的樣品類型與挑戰(zhàn)

1、常見樣品來源

（1）組織樣本：如肝、腦、腫瘤組織等，常用于臨床研究或動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)

（2）細(xì)胞樣本：培養(yǎng)細(xì)胞或初代細(xì)胞，便于實(shí)驗(yàn)控制

（3）體液樣本：血清、血漿、尿液、腦脊液，適合生物標(biāo)志物篩選

（4）微量樣本：如外泌體、單細(xì)胞，挑戰(zhàn)在于總蛋白含量低

二、標(biāo)準(zhǔn)dànbáizhì測(cè)序樣品制備流程

2、樣品制備的挑戰(zhàn)

（1）蛋白濃度差異大、動(dòng)態(tài)范圍寬

（2）脂質(zhì)、DNA、鹽離子等干擾物影響酶解與上機(jī)效率

（3）蛋白變性、聚集或降解導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差

1、細(xì)胞/組織裂解

樣本裂解是釋放總蛋白的dìyī步，需同時(shí)考慮裂解效率與蛋白穩(wěn)定性。常用緩沖液包括：

（1）RIPA緩沖液：適合多數(shù)細(xì)胞裂解，兼容磷酸化蛋白分析

（2）尿素/硫脲裂解液：適合組織樣本，強(qiáng)力變性，便于溶解膜蛋白

（3）SDS緩沖液：用于SDS-PAGE分析或Filter-Aided Sample Prep（FASP）

建議：加入蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，防止降解和修飾丟失。

2、蛋白定量與質(zhì)量控制準(zhǔn)確定量是標(biāo)準(zhǔn)化處理的基礎(chǔ)，常用方法包括：

（1）BCA法（推薦）：抗干擾能力強(qiáng)，適合大多數(shù)裂解液

（2）Bradford法：操作簡(jiǎn)單，但對(duì)某些緩沖液敏感

（3）SDS-PAGE預(yù)檢：檢測(cè)蛋白完整性、降解情況

3、蛋白還原與烷基化

確保dànbáizhì充分展開并暴露肽鍵，利于后續(xù)酶切。

（1）還原劑：DTT或TCEP，破壞二硫鍵

（2）烷基化劑：IAA或CAA，阻止二硫鍵重建

（3）在37°C下反應(yīng)30–60分鐘效果較佳

4、酶切（yídànbáiméi消化）

yídànbáiméi是質(zhì)譜前酶解的金標(biāo)準(zhǔn)，按1:50–1:100（酶:底物）的比例消化，常于37°C過夜反應(yīng)。

（1）可輔以Lys-C、Glu-C等酶提升覆蓋率

（2）酶切前建議脫鹽或稀釋，避免高濃度尿素抑制酶活

5、脫鹽與純化

酶切后，樣品中仍含鹽、雜質(zhì)、yíméi殘留，需清除干擾以提升質(zhì)譜靈敏度。

（1）C18固相萃取柱（SPE）：保留肽段，去除小分子雜質(zhì)

（2）StageTips方法：微量樣本理想選擇

（3）脫鹽標(biāo)準(zhǔn)：樣品導(dǎo)電度應(yīng)降至<1 μS/cm

不同應(yīng)用對(duì)樣品制備的特殊要求：

6、上樣前質(zhì)控

準(zhǔn)備上機(jī)前必須評(píng)估樣品質(zhì)量：

百泰派克生物科技dànbáizhì測(cè)序服務(wù)

在百泰派克生物科技，我們建立了標(biāo)準(zhǔn)化、可追溯、MS兼容的樣品制備流程，涵蓋從樣本裂解到酶解、脫鹽、質(zhì)控的每一步：

• 支持多種樣本類型（組織、細(xì)胞、體液、外泌體等）

• 引入自動(dòng)化處理平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)高通量無批次效應(yīng)

• 提供上機(jī)前肽段質(zhì)控報(bào)告，確保數(shù)據(jù)質(zhì)量

• 技術(shù)團(tuán)隊(duì)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄈ缌姿峄?、修飾組、標(biāo)記定量）定制專屬方案

無論是科研探索還是臨床項(xiàng)目，我們都能以zhuānyè、高效的樣品處理能力，助力您的dànbáizhì組學(xué)研究從源頭把控?cái)?shù)據(jù)質(zhì)量。dànbáizhì測(cè)序的每一步都建立在樣品質(zhì)量的基礎(chǔ)之上。只有在制備環(huán)節(jié)做到標(biāo)準(zhǔn)化、可控、質(zhì)譜兼容，才能確保下游數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。百泰派克生物科技愿為您提供zhuānyè的樣品處理支持，讓您的蛋白組學(xué)研究邁出穩(wěn)健dìyī步。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

蛋白質(zhì)測(cè)序樣品制備檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹