Edman降解的工作流程檢測技術服務詳情介紹

在dànbáizhì組學飛速發(fā)展的jīntiān，質譜（Mass Spectrometry, MS）已成為主流蛋白測序手段。然而，Edman降解（Edman degradation）作為一種經(jīng)典的Nduāncèxù技術，依舊在特定場景中具有bùkětìdài的價值。尤其是在確認dànbáizhìN端修飾、驗證重組蛋白表達正確性或新型肽段結構鑒定方面，Edman降解以其直接、jīngquè的特性發(fā)揮著dútè作用。

什么是Edman降解？

Edman降解是一種基于化學反應的順序性氨基酸切除方法，用于從多肽鏈N端開始逐個識別氨基酸殘基。其原理由Pehr Edman于1950年提出，并迅速成為20世紀dànbáizhì一級結構研究的重要工具。

Edman降解的標準工作流程

Step 1：樣品準備（Sample Preparation）

• 樣本要求：高純度、多肽鏈長度通常在30個氨基酸以內(nèi)，N端未被修飾（如乙酰化或阻斷）。

• 固定方式：通常將肽鏈通過共價鍵固定于固相載體（如PVDF膜），以便后續(xù)循環(huán)操作。

Step 2：N端氨基酸標記（Labeling）

• 使用苯異硫氰酸酯（PITC, phenylisothiocyanate）與N端氨基酸發(fā)生反應，形成PTH-氨基酸衍生物。

• 該反應在堿性條件下進行，通?？刂圃趐H 9.0左右，以促進高效衍生化。

Step 3：選擇性裂解（Cleavage）

• 在酸性條件（如三fúyǐsuān存在下）下，斷裂N端氨基酸與多肽主鏈之間的肽鍵。

• 此步驟不會破壞剩余肽鏈，確保反應具有高度順序性和循環(huán)性。

Step 4：PTH-氨基酸鑒定（Identification）

• 所得到的PTH-氨基酸通過高效液相色譜（HPLC）或毛細管電泳進行分離和鑒定。

• 每一個氨基酸都有dútè保留時間，便于與標準品比對，完成定性分析。

Step 5：循環(huán)執(zhí)行（Cycle Repetition）

• 剩余肽鏈重復步驟2-4，每一輪提取一個N端氨基酸，直到多肽鏈長度耗盡或信號減弱至無法檢測。

• 通常Edman降解可穩(wěn)定進行15–20輪，但在高質量樣本與zhuānyè操作下，也能延伸至30個殘基以上。

Edman降解的優(yōu)勢與局限

? 優(yōu)勢

• N端專一性強：對肽鏈起始殘基有直接測序能力，適用于抗體、激素、信號肽驗證等場景；

• 無需復雜數(shù)據(jù)庫比對：不同于MS，Edman降解直接輸出序列，避免算法偏差；

• 適合小分子肽段分析：尤其適合30個氨基酸以內(nèi)的結構解析。

??局限

• N端修飾限制：如N-乙?；?、N-甲?；葧钄喾磻?；

• 效率遞減：隨著循環(huán)次數(shù)增加，背景噪音加劇，測序精度下降；

• 不適用于混合樣本：多組分混雜時難以區(qū)分PTH-產(chǎn)物來源。

應用實例

在單克隆抗體開發(fā)過程中，Edman降解常被用于：

• 驗證重組抗體的N端一致性；

• 確認Fab段、Fc段是否表達正確；

• 輔助質譜結果，增強結構確認的可靠性。

?特別是在質譜未能明確區(qū)分N端修飾種類時，Edman降解可提供關鍵佐證信息。

盡管質譜已成為dànbáizhì測序主流，但Edman降解作為經(jīng)典化學方法，依舊在結構確認、N端修飾驗證等領域扮演著bùkětìdài的角色。選擇合適的測序策略，結合zhuānyè服務平臺，是實現(xiàn)高質量科研或產(chǎn)品開發(fā)的關鍵。百泰派克生物科技整合經(jīng)典Edman測序與現(xiàn)代質譜手段，為蛋白結構解析提供多維解決方案。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數(shù)據(jù)轉換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術先進，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優(yōu)質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!

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